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ELISA 蛋白提取、分離和溶解緩沖液
60 ml、1X、pH 7.4 溫和的去污劑蛋白質(zhì)提取緩沖液，可保持 ELISA 樣品分離所需的抗體-抗原相互作用。從大多數(shù)細胞隔室中提取蛋白質(zhì)，包括用于 ELISA 樣品制備的膜、細胞質(zhì)和細胞器。
強調(diào)
用于 ELISA 樣品制備的經(jīng)過驗證的配方。
廣泛適用于大多數(shù)用于 ELISA 樣品制備的細胞質(zhì)、跨膜和細胞外蛋白。
方便的預(yù)混合 1X 溶液。
與 Bradford 等蛋白質(zhì)濃度測定兼容。
內(nèi)容
60 ml ELISA 蛋白提取緩沖液 pH 7.4
ELISA 蛋白提取緩沖液含有溫和的去污劑，能夠溶解細胞膜、溶解大多數(shù)膜蛋白并將胞質(zhì)蛋白懸浮到緩沖液中。
方案概述：ELISA 蛋白提取緩沖液
為每個 10 厘米培養(yǎng)皿準(zhǔn)備 500 µl ELISA 蛋白提取緩沖液，或為 6 孔培養(yǎng)皿中的每個孔準(zhǔn)備 200 µl。使溶液冰冷并加入蛋白酶抑制劑，包括絲氨酸蛋白酶抑制劑（如 PMSF）。如果需要，還可以添加通用磷酸酶抑制劑。
取出培養(yǎng)基并用 PBS 沖洗細胞 3 次。
在每個 10 厘米的培養(yǎng)皿中加入 500 µl ELISA 蛋白提取緩沖液。旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿，用 ELISA 蛋白提取緩沖液覆蓋細胞，并在冰床上放置 5 分鐘。
從培養(yǎng)皿上刮下細胞，然后轉(zhuǎn)移到合適的管中。旋轉(zhuǎn)并輕敲試管數(shù)次以溶解膜。您應(yīng)該觀察與基因組 DNA 相對應(yīng)的纖維材料，這是細胞裂解的指標(biāo)。如果纖維材料不明顯，加入 20 µl ELISA 蛋白提取緩沖液等分試樣，旋轉(zhuǎn)并輕敲直到觀察到纖維材料。將管子在冰上再放置 15 分鐘。
4 o C離心15 分鐘，收集上清液，用于 ELISA 檢測。蛋白質(zhì)濃度測定，例如 Bradford 測定，可用于量化總蛋白質(zhì)濃度。將上清液也可以被存儲在-80 ? C長術(shù)語
